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基于磁性纳米颗粒的核酸提取方法

2024-02-22

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。核酸作为基因表达的物质基础,是分子生物学研究的主要对象。无论是进行核酸的结构还是功能研究,都需要对核酸进行提取和纯化,

以下为核酸提取的基本原理和方法。

核酸提取的方法和基本原理

序号

名称

基本原理

/缺点

1

煮沸裂解法

线状染色体DNA容易受热变性,共价键合的质粒DNA在冷却时即恢复其天然构象;变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中,从而可通过离心将两者分开

煮沸裂解法提取DNA,得量少,杂质多,DNA可能会出现断裂,主要适用于一些粗略的实验

2

-氯仿抽法

苯酚与蛋白分子表面极性基团相似相溶,同时抑制了DNase的降解作用,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA。离心后,DNA可取出

获得的DNA纯度高、片段大、效果好,缺点是操作较为繁琐、试剂安全问题

3

浓盐法

利用RNADNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离

优点是省略了酚氯仿抽提操作的麻烦,并且几乎克服了酚氯仿抽提方法的一切缺点,只是得到DNA的纯度不够稳定

4

阴离子去污剂法

将生物细胞破碎后,加入SDS使细胞膜裂解,使蛋白质变性,将蛋白质和多糖等杂质与DNA分开,加入乙酸钾可使SDS-蛋白质复合物转变成溶解度更小的钾盐形式,使沉淀更加完全

产物含糖类杂质较多

5

异硫氰酸胍/苯酚法

加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质

Trizol法适用于普通的植物组织、动物组织以及真菌和细菌等的RNA提取实验

6

CTAB

在细胞破碎后,即可加入CTAB分离缓冲液,将DNA溶解出来,再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质,最后用乙醇沉淀得到DNA

DNA样品不纯,影响后续酶解和PCR反应






















基于上述核酸提取方法及原理,首先出现了离心柱(过柱)法核酸提取,主要原理是将对核酸有吸附作用的官能基团固定在离心柱模上,通过加入不同的裂解试剂、洗涤试剂并反复离心,以达到核酸与杂质分离的目的,获得纯化的核酸。离心柱法DNA提取它的优点是比传统的酚氯法提取的纯度高,有利于RNA保护,而且能进行微量操作,以其低廉的价格和相对便捷的操作,逐渐取代了传统DNA提取方法,被高校科研所等市场普遍接受。

但这种方法需要较多的样本,损耗多,对于珍稀样本无能为力,特别是在法医、考古等领域显得力不从心。同时离心柱法DNA提取需要反复离心,不便于高通量、自动化操作,与现代生物学实验的高通量、自动化要求格格不入,特别是在基因诊断、疾病检测、转基因检测等领域,离心柱法DNA提取需要大量的操作人员及仪器设备。

当面对突发疫情时,更是需要有高通量的DNA提取设备与方法才能更有效准确地监测疫情、控制疫情。为此需要一种新的DNA提取方法解决这个实际难题。在这个时代潮流需求的驱动下,磁珠法核酸提取应运而生。

磁珠法的原理是在磁珠表面修饰有对核酸有吸附作用的特定活性官能基团,通过不同的裂解液结合液洗涤液在特定的条件下能够与目的物质进行特异性结合,同时利用磁珠自身的磁性,在外磁场的作用下可以方便的实现定向移动与富集,从而达到核酸与杂质分离的目的,进而实现对目标物质的分离纯化,获得纯化核酸。

磁珠法是纳米科技与生物技术的完美结合,具有其他DNA提取方法无法比拟的优势,主要体现在:

(1)能够实现自动化、高通量操作,配合核酸自动提取仪,在以往做一个样品的提取时间内可同时实现对大量样品的处理,满足了当前生物学高通量操作的要求,使得在大规模疫情暴发时能够进行快速筛查原因,这个优点是其他方法难以赶超的。

(2)操作简单、用时短,整个提取流程只有裂解、结合、洗涤、洗脱四步短时间内即可完成。

(3)安全无毒,不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害少,保护了实验人员的身体健康。

(4)磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。

(5)灵敏度高,适合法医样本等痕量DNA提取。

随着当代生物学的高速发展及核酸提取仪的大量普及,为了满足时代要求,磁珠法DNA提取为广大科研工作者提高试验效率,简化试验过程提供强有力的技术支持和产品保障,磁珠法DNA提取也将成为现代分子生物学的主流。

本公司生产了以下多款核酸提取磁珠,可满足广大科研人员不同需求:

本公司生产核酸提取磁珠

16系列

         


23系列

上海领骏生物科技有限公司成立于2016年,位于上海市青浦区张江云立方园区。公司长期致力于生物领域内相关产品的研发、生产和销售,产品主要包括磁性纳米材料和磁珠法核酸提取纯化试剂。公司一直坚持以“质量、诚信、团结、奋进”为宗旨,严格规范质量管理体系,持续创新、精益求精,为客户提供优质的产品和服务,被认定为国家级高新技术企业和上海市专精特新企业。